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高效液相色譜系統(tǒng)在日常中主要用以下這四種色譜法

更新時(shí)間:2020-03-25        閱讀:2562
   高效液相色譜系統(tǒng)根據(jù)分離機(jī)制的不同,HPLC原理可分為離子交換色譜法、分子排阻色譜法、液固吸附色譜法及液液分配色譜法。
 
  1、離子交換色譜法:
  固定相是離子交換樹脂。樹脂上可電離離子與流動(dòng)相中具有相同電荷的離子及被測(cè)組分的離子進(jìn)行交換,根據(jù)各離子與離子交換基團(tuán)具有不同的電荷吸引力而分離。
 
  2、分子排阻色譜法:
  分子排阻色譜法又稱凝膠色譜法,它是按照分子尺寸大小順序進(jìn)行分離的一種色譜方法。分子排阻色譜法的固定相凝膠是一種多孔性的聚合材料,有一定的形狀和穩(wěn)定性,利用分子篩對(duì)分子量大小不同的各組分排阻能力的差異而完成分離。根據(jù)所用流動(dòng)相的不同,凝膠色譜法可以分為兩類:即用水溶劑做流動(dòng)相的凝膠過濾色譜法(GFC)與用有機(jī)溶劑如THF做流動(dòng)相的凝膠滲透色譜法(GPC)。
 
  3、液液分配色譜法:
  固定相為液體,根據(jù)被分離的組分在流動(dòng)相和固定相中的溶解度不同而分離。依固定相和流動(dòng)相的極性不同可分為正相色譜法和反相色譜法。正相色譜法采用極性固定相,流動(dòng)相為相對(duì)非極性的疏水性溶劑,常用于分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物;反相色譜法一般用非極性固定相,流動(dòng)相為水或緩沖溶液,適用于分離非極性和極性較弱的化合物。其中,反相色譜應(yīng)用Zui廣。
 
  4、液固吸附色譜法:
  液固吸附色譜法中,固定相為固體吸附劑,根據(jù)各組分吸附能力差異而使組分得以分離。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁,大多數(shù)用于非離子型化合物。吸附色譜固定相可以分為極性和非極性兩大類。對(duì)流動(dòng)相的要求為:
  a、選用的溶劑應(yīng)當(dāng)與固定相互不相溶,并能保持色譜柱的穩(wěn)定性。
  b、選用的溶劑應(yīng)有高純度,以防所含微量雜質(zhì)在柱中積累,引起柱性能的改變。
  c、選用的溶劑性能應(yīng)與所使用的檢測(cè)器相匹配,如果使用紫外吸收檢測(cè)器,就不能選用在檢測(cè)波長(zhǎng)下有紫外吸收的溶劑;若使用示差折光檢測(cè)器,就不能用梯度洗脫。
  d、選用的溶劑應(yīng)對(duì)樣品有足夠的溶解能力,以提高測(cè)定的靈敏度。
  e、選用的溶劑應(yīng)具有低的黏度和適當(dāng)?shù)偷姆悬c(diǎn)。
  f、應(yīng)盡量避免使用具有顯著毒性的溶劑,以保證工作人員的安全。
  液固色譜法是以表面吸附性能力為依據(jù)的,所以它常用于分離極性不同的化合物,也能分離那些具有相同極性基團(tuán),但數(shù)量不同的樣品。

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